《Quick Cell快速支原體檢測(cè)試劑盒》主要用于檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎(chǔ)科研。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，支原體（Mycoplasma）污染是個(gè)世界性的問(wèn)題。支原體污染幾乎可以改變細(xì)胞的所有參數(shù)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確、甚至*錯(cuò)誤。從2013年開(kāi)始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。本試劑盒可以檢測(cè)：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見(jiàn)的污染細(xì)胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫(xiě)）。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產(chǎn)品全部可以檢測(cè)。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無(wú)法檢測(cè)Ureaplasma Urealyticum支原體！Ureaplasma Urealyticum在支原體污染種極其罕見(jiàn)。

與PCR法檢測(cè)支原體比較，本試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)顯著：

試劑盒組成

（1）溶液Ⅰ：1150 μL （50次檢測(cè)）

（2）溶液Ⅱ：50 μL（50次檢測(cè)）

（3）溶液Ⅲ：指示劑，50 μL（50次檢測(cè)）

（4）陽(yáng)性支原體DNA：50 μL

（5）礦物油：1500 μL

使用方法

1. 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備：為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染，待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品來(lái)源于至少培養(yǎng)三天且匯合度在70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清（貼壁細(xì)胞），無(wú)需離心。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后，至少讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)，也無(wú)需離心。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

注：收集的待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測(cè)，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃可以長(zhǎng)期保存。此外，為了節(jié)約檢測(cè)成本，可以將不同時(shí)間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測(cè)。

2. 反應(yīng)體系的配制

表1：恒溫反應(yīng)體系的配制

（1）將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，待其融化后（可在37 ℃ 水浴內(nèi)放置5-10分鐘以幫助融化），從-20℃冰箱中取出溶液Ⅱ置于冰上。吹吸均勻后，按表1比例，混合溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ。如有多個(gè)樣品，為了防止移液誤差，建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數(shù)1.08，保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量。從配液開(kāi)始的所有步驟，均在冰上操作。

舉例：如果待測(cè)樣品為3個(gè)（加上1個(gè)陰性和1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），則樣品總數(shù)為5個(gè)。溶液Ⅰ的總體積為23×5×1.08=124.2μL，溶液Ⅱ的總體積為1×5×1.08=5.4μL，溶液Ⅲ的總體積為0.18×5×1.08=0.972 μL將溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合均勻。

注：溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存，并在操作時(shí)置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20 ℃條件下仍為液態(tài)，不需置于室溫。

（2）將上述配制好的反應(yīng)體系，吹打均勻后，按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應(yīng)液體積一樣。 PCR管應(yīng)該使用透明度良好的薄壁PCR管。

（3）往測(cè)試管（Test）中加入1μL待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液；往陽(yáng)性對(duì)照管（Positive）中加入1 μL陽(yáng)性支原體DNA；往陰性對(duì)照管（Negative）中加入1μL滅菌水；反應(yīng)液的總體積為25 μL。

注1：裝有陽(yáng)性支原體DNA的螺口管開(kāi)蓋之前，用力甩一下，或者用迷你離心機(jī)即可。

注2：進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間，與進(jìn)行樣品前處理、加陽(yáng)性對(duì)照DNA、樣品DNA的房間分開(kāi)。

3. 反應(yīng)

PCR儀設(shè)置程序：61℃，60 min；10℃, forever；熱蓋溫度，100 ℃。

注意：若實(shí)驗(yàn)室反應(yīng)場(chǎng)所沒(méi)有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差不超過(guò)0.5℃，另須往每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)加入25μL礦物油，以防止水份揮發(fā)，然后蓋上蓋子，將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi)，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi)，準(zhǔn)確反應(yīng)60分鐘。

4. 結(jié)果判斷

61℃反應(yīng)60分鐘后，立刻取出反應(yīng)管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過(guò)反應(yīng)管溶液顏色的變化，即可判斷檢測(cè)結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色，則說(shuō)明有支原體污染；如果為紫紅色，則說(shuō)明沒(méi)有支原體污染（如圖1）。

注：在61℃反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，zui多不得超過(guò)5分鐘，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。必須在反應(yīng)后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判斷，避免室溫下擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，影響結(jié)果判別。