產(chǎn)品描述

PikoGreen dsDNA quantitation reagent是一種極為靈敏的雙鏈DNA熒光染料，僅與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25 pg/mL的dsDNA。與傳統(tǒng)DNA定量方法相比，具有靈敏度高，特異性強，耐受性好，線性范圍寬及方便操作等優(yōu)點，適用于cDNA文庫構(gòu)建、DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物等領域的DNA濃度的精確測定。相比傳統(tǒng)的方法，Pikogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢：

1. 靈敏：數(shù)量級較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省樣品。

2. 特異性強：只結(jié)合dsDNA，特異性強，不受樣品常規(guī)污染影響。傳統(tǒng)紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA，蛋白，RNA等影響。

3. 耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無需從反應混合物中純化DNA。

4. 線性范圍寬：PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度，在100pg/ml-100ng/ml范圍內(nèi)呈良好線性；熒光計兼容。

5. 容易使用：在樣品中加入染料，等待5~6 min染色，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板。與大多數(shù)基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析、PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。

該分析在四個數(shù)量級范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o序列依賴性，可以精確地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產(chǎn)物。該方法因其穩(wěn)定性、靈敏性，已經(jīng)錄入《中國藥典》。
訂購信息

運輸與保存
藍冰運輸。-20℃避光保存，有效期24個月。
使用方法
1. PikoGreen工作液的配制
使用前將PikoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PikoGreen以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管）。實驗當天，根據(jù)實驗需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準備足夠的操作溶液以2 mL檢測體系測定20個樣品，可向19.9 mL 1×TE 中加入100 µL PikoGreen dsDNA 定量試劑。工作液見光易降解，盡量在配好后幾小時內(nèi)使用。
2. 配制標準品DNA溶液
（1）用1 X TE溶液溶解dsDNA制備1 μg/mL dsDNA 。根據(jù)在1 cm 光程長度的比色杯中A260 nm時的吸光度確定DNA 濃度；相應于1 μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。標準液常用小牛胸腺DNA制備，PikoGreen 試劑測定法在通常污染核酸*劑的幾種復合物存在的條件下仍能保持線性良好，但是，為了得到有效的對照處理，被用來做標準曲線的dsDNA 溶液要用和實驗樣品相同的方式來處理，并且應該包含相同的可能存在的污染物。
（2）制備從0.5 ng/mL 到500ng/mL（見表1）單重復8 個點的標準曲線。配制一系列的標準DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和，放入1 x 1cm 比色杯中。混合相同體積的1 x TE 和PikoGreen 操作溶液作為空白對照,避光于室溫下放置2~5 min。

表1: 用1 x 1cm 比色杯時DNA 標準濃度配制參考

（3） 當用微量檢測皿適配器時，PikoGreen 測定也可在較低的測定體積（50 μL 到200 μL）內(nèi)完成。產(chǎn)生從1 ng/mL 到100 ng/mL（見表2）的標準曲線，配制一系列的標準DNA 溶液，然后與等體積的PikoGreen 工作液混和，將至少50 μL 溶液轉(zhuǎn)移到微量檢測皿中。確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部經(jīng)常可以驅(qū)散氣泡。避光于室溫下放置2-5 min。

表2：用微量檢測皿DNA 標準濃配制參考

（4） 孵育后用合適的熒光計測量樣品熒光值。Ex/Em=480 nm/520 nm，為了減少光漂白，應保持所有樣品的檢測時間一致。用熒光值最大的樣品校正儀器。
（5）用檢測數(shù)據(jù)與DNA標準溶液濃度做回歸分析，制作標準曲線。
3. 樣品分析
（1）用1 x TE 稀釋待測DNA 樣品至需要的體積（1x1 cm 比色杯需1.0 mL，微量檢測皿需25~100 μL）。對樣品高度稀釋可以確保任何污染物都被最大限度地沖淡。然而，也要避免取樣體積太小而無法精確吸取的情況。
（2）在每個樣品中加入等體積PikoGreen 工作液，混合好，將混合物移入合適的比色杯，避光于室溫下放置2~5 min。
（3）檢測、讀取熒光值，換算樣品中dsDNA濃度。可以對樣品進行不同的稀釋處理重復測定以確保結(jié)果的準確性。
注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2. PikoGreen定量試劑含有DMSO，PikoGreen 是結(jié)合dsDNA，操作時采取適當防護，戴手套小心操作。

3. 盡管常見污染物不會影響PikoGreen 檢測dsDNA濃度（見表3），但是當樣品中dsDNA濃度太低，RNA, ssDNA濃度超過dsDNA 10倍以上時，RNA, ssDNA等污染還是會對檢測結(jié)果產(chǎn)生較大干擾，在此種情況下，RNA 酶可以消除RNA干擾, RNA 酶A、酶T1 、核酸酶S1 結(jié)合能除去ssDNA干擾，從而保證樣品熒光值是由dsDNA 產(chǎn)生。

表3：Pikogreen定量耐受的污染物列表

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