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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫...

一、什么是細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞。二、細(xì)胞增殖的意義和方式意義：細(xì)胞增殖是生活細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征。細(xì)胞的增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。方式：真核生物的分裂依據(jù)過程不同有三種方式，有有絲分裂，無絲分裂，減數(shù)分裂。其中有絲分裂是人、動物、植物、真菌等一切真核生物中的一種zui為普遍的分...

在Western實(shí)驗中，蛋白Marker可以監(jiān)控蛋白質(zhì)在SDS-PAGE中的遷移，監(jiān)控蛋白的轉(zhuǎn)膜效率，確定蛋白分子量大小。選擇正確的蛋白Marker是westernblot實(shí)驗成功的條件之一。蛋白Marker分為兩種：一種是未預(yù)染的Marker，即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)，高分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)及低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)；另一種是預(yù)染的Marker，即單色預(yù)染和多色預(yù)染。一、未預(yù)染蛋白Marker未預(yù)染的蛋白Marker是簡單，也是最準(zhǔn)確的一種，由于沒有附帶染料分子或者標(biāo)記大小正好是蛋白原本的大小...

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常加入5%-20%的Gibco胎牛血清，最常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細(xì)胞的基因表達(dá)譜，影響后續(xù)實(shí)驗的結(jié)果，我們在實(shí)驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養(yǎng)293T細(xì)胞，效果非常好。但是有些細(xì)胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清，要根據(jù)具體細(xì)胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。為防止客戶由于操作方面而使黑點(diǎn)生成的辦法。對此一定要做好以下幾點(diǎn)。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。（1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。（...

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。如何避免胎牛血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍...

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。形態(tài)學(xué)檢測是研究細(xì)胞凋亡的基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個個空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂成碎塊，此時細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個細(xì)胞變成數(shù)個大小不等的有膜...